Сайт использует файлы cookie. Продолжая пользоваться нашим сайтом, вы соглашаетесь на использование нами ваших данных.
Узнать больше
Принять и продолжить
научный обзор

Внеклеточные везикулы.
Когда золотник дорог.
Часть 1: что это?

Алексей Ржешевский, Ольга Борисова
30 ноября 2019
Введение
В ходе эволюции простейшие клетки (прокариоты) и более сложные (эукариоты) развивали способность межклеточной коммуникации, что было необходимо для жизнедеятельности. Такая коммуникация помогает бактериям координировать деятельность в больших группах через мониторинг окружающей среды и влияние на поведение других бактерий.

Многоклеточным организмам сложная межклеточная коммуникация позволяет функционировать как единая система различных органов и тканей.

Классическими видами взаимодействия между эукариотическими клетками считаются прямое взаимодействие (юкстакринная передача сигналов — через плазматическую мембрану рядом расположенной клетки) и взаимодействиепосредством секреции растворимых факторов (гормонов, факторов роста, цитокинов).
Эти факторы могут воздействовать на саму клетку (аутокринная передача сигналов), на соседние (паракринная передача) и на отдаленные клетки (эндокринная передача сигналов).

Ещё один способ межклеточной коммуникации — это перенос информации между клетками с помощью внеклеточных везикул.

Эти крошечные пузырьки, окруженные мембраной, сегодня в центре внимания научного мира благодаря удивительной способности влиять как на физиологические, так и на патологические процессы. Использование внутривезикулярных грузов в качестве биомаркеров патологий и самих везикул как терапевтических средств доставки лекарств сегодня активно изучается и имеет немалый потенциал.
Неслучайными выглядят целые международные и национальные научные сообщества, посвящённые внеклеточным везикулам: International Society for Extracellular Vesicles, German Society for Extracellular Vesicles, American Society for Exosomes and Microvesicles.

Помимо персонального журнала (Journal of Extracellular Vesicles), везикулам посвящены три базы данных: Vesiclepedia, EVpedia и ExoCarta. В одной из них (Vesiclepedia), во внеклеточных везикулах на ноябрь 2019 года было обнаружено 349 988 белков, 27 646 мРНК, 10 520 микроРНК, 639 липидов в ходе проведенных 1 254 исследований (Ноябрь, 2019).
Виды внеклеточных везикул, история изучения и биогенез
Внеклеточные везикулы (ВВ)
Мембранные пузырьки, высвобождаемые эволюционно консервативным способом большинством живых клеток организмов (от бактерий до млекопитающих).

То есть в процессе эволюции везикулы и процесс их высвобождения сохранился у всех живых организмов.
Физиологические функции ВВ заключаются в поддержании внутриклеточного гомеостаза (удалении клеточного «мусора») и передачи информации (в т.ч. генетической) другим клеткам.

У бактерий и эукариотических микроорганизмов ВВ играют важную роль во взаимодействии хозяин-патоген и опосредуют высвобождение в окружающую среду таких соединений, как факторы вирулентности и токсины.

ВВ-опосредованные сигналы могут передаваться различными видами биомолекул: белками, липидами, нуклеиновыми кислотами и сахарами. Окруженные мембранами, ВВ обеспечивают надежную защиту и доставку своего «груза» как в рядом расположенные, так и в удаленные от них клетки.

Наличие ВВ у всех видов живых организмов (архей, прокариот и эукариот) позволило ученым предположить, что секреция ВВ происходила на самых ранних этапах зарождения жизни у общего клеточного предка LUCA.
LUCA — Last universal common ancestor — последний общий клеточный предок, от которого произошли все существующие сейчас клетки: эукариоты, археи и прокариоты. Жил на Земле около 4 млрд. лет назад в виде сообществ одноклеточных организмов.
Первые свидетельства нахождения ВВ внутри организма были получены в 1946 году R. West и соавт., которые обнаружили в плазме крови неизвестные микроскопические частицы с прокоагулянтными (повышающими свёртываемость крови) свойствами. В 1967 году учёные снова столкнулись с этим феноменом, высвобождением из тромбоцитов неизвестных частиц, повышающих свертываемость крови, которые назвали «тромбоцитарной пылью».

Вплоть до начала XXI века ВВ считались малозначимой «экзотикой», пока учёные не взялись за них всерьёз, обнаружив массу важных и интересных функций ВВ.

Интерес к ним значительно усилился после 2006 года, когда было обнаружено, что ВВ могут переносить между клетками различные РНК, включая матричную и микроРНК. Позже было установлен перенос ВВ митохондриальной, одноцепочечной и двухцепочечной ядерной ДНК.

Сегодня ВВ выделены из большинства типов клеток и жидкостей организма (в том числе желчь, грудное молоко, слюна, моча, сперма, кровь, спинномозговая, амниотическая и синовиальная жидкость).
Виды везикул
Первоначальное видовое обилие ВВ (аргосома, кардиосома, детеросома, эктосома, онкосома, себосома) сегодня среди исследователей принято сводить до 3 видов: экзосомы, микровезикулы и апоптотические тельца.
1
Экзосомы
Представляют наименьший подтип ВВ (размером 30–150 нм), который сегодня наиболее хорошо изучен. Впервые процесс высвобождения экзосом из клеток во внеклеточное пространство был описан в ретикулоцитах крысы в 1983 году, а затем — в ретикулоцитах овец в 1985 г. Пионер в изучении экзосом, R.M. Johnstone, в 1987 году предложила термин «экзосома».

Процесс высвобождения экзосом происходит в несколько этапов:
1
Формирование пузырька внутри клетки
Формирование внутри клетки ранней эндосомы из части клеточной мембраны
2
Внутри пузырька образуются другие пузырьки
Превращение ранних эндосом в поздние (т.н. мультивезикулярные тела, MVBs), заполненные внутрипросветными везикулами (ILVs)
3
Пузырёк идёт к поверхности клетки
Транспорт MVBs к плазматической мембране
4
Слипание с мембраной клетки
Слияние MVBs с плазматической мембраной
5
Выход наружу
Высвобождение ILVs, ставших уже экзосомами, во внеклеточное пространство
Этапы описанного выше биогенеза экзосом происходят при активном участии различных регуляторных белков: белковых комплексов ESCRT, белков Alix, ARRDC1, тетраспанинов и др.

Судьба экзосомы зависит от липидного состава мембранных белков эндосомы: если мембрана эндосомы содержит лизобисфосфатидиловую кислоту (фосфатидилинозитол3-фосфат) и убиквитинированные белки, то далее будет слияние с лизосомой и утилизация содержимого. Если же мембрана эндосомы содержит церамиды, эндосома сливается с поверхностной мембраной донорской клетки, и уже в виде множества экзосом секретируется во внеклеточную среду.
2
Микровезикулы
Или эктосомы — ВВ размером 100–1000 нм, которые отпочковываются от плазматической мембраны.

В отличие от экзосом, на сегодня они изучены гораздо меньше. Хотя и для них характерно участие в важных биохимических процессах, связанных с коагуляцией, иммунитетом, онкогенезом, коммуникацией матери и плода, сердечно-сосудистыми патологиями и др.

Ключевой элемент в биогенезе микровезикул — это фосфолипид плазматической мембраны фосфатидилсерин (PS). Перемещение PS под воздействием ряда факторов на внешнюю сторону мембраны клетки вызывает её выпячивание и отпочкование микровезикул. Вместе с этим, остаётся неясным один момент: почему в процессе отпочкования микровезикул не происходит "подчищение" фагоцитозом клетки, помеченной PS?

Кальций и холестерин также играют немаловажную роль в биогенезе микровезикул.

Характерный для микровезикул молекулярный состав включает в себя матриксные металлопротеиназы (ММР), гликопротеины и интегрины. Недавние исследования показали, что MMP2 может быть использована в качестве маркера микровезикул.

Вместе с этим, белковый состав микровезикул в значительной степени зависит от типа клетки. К примеру, маркер эпителиальных клеток CK18 в большом количестве содержался в эктосомах, секретируемых именно этими клетками.
3
Апоптозные тельца
Третий класс везикул размером около 50–5000 нм, которые образуются при гибели клетки.
Апоптоз — это запрограммированная гибель клеток и последующее фагоцитарное удаление частей погибших клеток необходимо во время эмбрионального развития, роста, и нормальной физиологии многоклеточных организмов.

Апоптоз обеспечивает удаление старых, поврежденных, инфицированных или аберрантных клеток из здоровых тканей. Он представляет собой скоординированный демонтаж клетки, после которого фрагменты погибшей клетки упаковывается в апоптозные тельца с последующей утилизацией (рис.1)
Рисунок 1
Этапы формирования и секреции различных ВВ: микровезикул, экзосом, апоптотических телец
Механизм того, как ВВ вступают в коммуникацию с целевыми клетками, ещё продолжает изучаться и не до конца ясен. Предполагается, что они взаимодействуют с клетками-реципиентами, локальными или удаленными от исходной клетки, посредством процесса, включающего сигнализацию лиганда/рецептора на поверхности клетки-мишени и/или слияние везикул и клеточных плазматических мембран. В большинстве случаев это приводит к поглощению ВВ посредством эндоцитоза.

В ходе этого процесса компоненты мембраны ВВ могут сливаться с мембраной клетки-мишени. А грузы ВВ входят в цитоплазму или ядро клетки-реципиента, тем самым внося дополнительные сигнальные молекулы и потенциально приводя к разнообразным функциональным последствиям в целевой клетке.

ВВ принимают активное участие в ряде физиологических процессов: иммунные реакции, клеточные миграции регенерации тканей, созревание эритроцитов, оплодотворение и эмбриональное развитие, функционирование нервной системы, очистка внутриклеточного «мусора» и др.
ВВ несут разные сигналы к клеткам-адресатам. Так, экзосомы выступают переносчиками нейромедиаторов при передаче нервного импульса. Кроме этого, они активно участвуют в презентации антигена — одного из ключевых процессов врождённого иммунитета. Также недавно было описано активное участие ВВ в процессах, связанных со старением. В связи с этим, в 2017 году было проведено исследование, показавшее потенциал в борьбе со старением трансплантации ВВ, полученных от молодых доноров (2017), о чём подробнее расскажем далее (примечание: во второй части этого текста). Также, ВВ — неотъемлемый компонент внеклеточного матрикса, обеспечивающий коммуникацию между его составляющими.

Вместе с переносом информации ВВ могут доставлять уже готовые белки для целевой клетки. К примеру, они переправляют от нейронов к мышечным клеткам мембранный белок синаптотагмин-4, который нужен для формирования нервно-мышечного соединения, передающего электрические сигналы от нейронов к мышечным клеткам. Во время беременности синцитиотрофобласт секретирует экзосомы с иммуносупрессивной активностью, которые ингибируют функцию материнской иммунной системы и способствуют выживанию плода.
Также известно, что экзосомы цитотрофобласта содержат биологически активные белки, которые могут взаимодействовать с материнским эндотелием и регулируют его функции.

Вместе с переносом информации ВВ могут доставлять уже готовые белки для целевой клетки. К примеру, они переправляют от нейронов к мышечным клеткам мембранный белок синаптотагмин-4, который нужен для формирования нервно-мышечного соединения, передающего электрические сигналы от нейронов к мышечным клеткам. Во время беременности синцитиотрофобласт секретирует экзосомы с иммуносупрессивной активностью, которые ингибируют функцию материнской иммунной системы и способствуют выживанию плода. Также известно, что экзосомы цитотрофобласта содержат биологически активные белки, которые могут взаимодействовать с материнским эндотелием и регулируют его функции.

Также ВВ вовлечены в патогенез многих заболеваний, в том числе тех, которые сегодня трудно поддаются лечению и выступают наиболее частой причиной смерти (сердечно-сосудистых, нейродегенеративных и др.).
Внеклеточные везикулы как средство коммуникации
Межклеточная коммуникация посредством секреции внеклеточных везикул представляет древний путь общения между клетками, который присущ всем формам жизни: бактериям, археям, эукариотам (рис. 2).

ВВ позволяют «заказным пакетам» со специфической молекулярной информацией обращаться к определенным клеткам-мишеням и далее быть доставленными точно и своевременно в конкретное место тела. Содержимое ВВ может включать: липиды, белки, нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) и даже митохондрии (Zaborowski M.P., 2015; Torralba D.., 2018). Каким образом клетки отбирают необходимую для послания молекулярную информацию до конца, еще непонятно. Белковый состав ВВ не полностью соответствует таковому родительской клетки (Doyle L.M., 2019).

Помимо этого, ВВ различного размера, биогенеза и типа груза могут быть выделены одной и той же клеткой (Maas, 2017). «Молекулярная посылка» маркирована специальной почтовой маркой и отправляется точно согласно указанному адресу — она взаимодействует только с клетками определенного типа. Предполагается, что она находит своего адресата по поверхностным рецепторам/лигандам (рис. 3 и 4).

Рисунок 2
Механизмы распознавания и связывания ВВ с таргетной клеткой: фагоцитоз, слияние мембран, рецептор-опосредованное, макропиноцитоз, клатрин-кавеолин-опосредованное, при помощи липидных рафтов
Рисунок 3
Рисунок 4
Молекулярный состав ВВ и поверхностные структуры, которые обеспечивают распознавание и адгезию клетками-мишенями.
Механизмы распознавания и связывания ВВ с таргетной клеткой: фагоцитоз, слияние мембран, рецептор-опосредованное, макропиноцитоз, клатрин-кавеолин-опосредованное, при помощи липидных рафтов.
Коммуникация в метаболическом гомеостазе
В последнее время ВВ отводят большую роль в процессах межорганной коммуникации с целью поддержания метаболического гомеостаза. Для регуляции метаболизма на уровне организма необходимо взаимодействие мозга, поджелудочной железы, печени, мышц и жировой ткани (рис.5).

Адипоциты «замечены» в процессе выделения экзосомоподобных ВВ, которые могут взаимодействовать с фибробластами, преадипоцитами, эндотелиальными и иммунными клетками, координируя ответ ткани на различную доступность топлива. Эти сигналы играют существенную роль в становлении инсулинорезистентности (ИР) и ожирения.

ВВ из адипоцитов мышей с ожирением запускают активацию макрофагов и ИР. В то же время, экзосомы, полученные из стволовых клеток жировой ткани, улучшают чувствительность к инсулину и приводят к снижению веса у мышей с ожирением. А ВВ из крупных, наполненных жиром, адипоцитов могут стимулировать синтез липидов у мелких адипоцитов в культуре клеток (Samuelson I., 2018).
Рисунок 5
ВВ участвуют в метаболической коммуникации между ключевыми метаболическими органами для поддержания гомеостаза. ВВ выделяются адипоцитами белой и бурой жировой ткани и гепатоцитами печени
Коммуникация стареющих клеток
«Молекулярные посылки», отправляемые старыми (сенесцентными) клетками, оказывают существенное влияние на организм (рис.6). Сенесцентные клетки выделяют больше ВВ, чем молодые, что приводит к провоспалительному сигналу. В то же время, с возрастом в плазме крови наблюдается снижение концентрации ВВ (в период с 30 до 70 лет), что может быть вызвано истощением пула стволовых клеток. Получается, что сигналы «старых» клеток растут, а «молодых» — падают.

При этом, при старении клеток происходит изменение состава ВВ, как РНК, так и белкового. У пожилых снижается количество галектина-3, который участвует в созревании остеобластов, что является одной из причин снижения образования костей с возрастом. Крупные EV, изолированные из плазмы пожилых или сенесцентных эндотелиальных клеток, приводили к кальцификации клеток гладких мышц аорты (Takasugi M., 2018).
Рисунок 6
ВВ, выделяемые сенесцентыми клетками, содержат факторы, которые участвуют в активации иммунных клеток, пролиферации онкоклеток, снижении процессов остеогенеза, кальцификации нарушении процессов миелинизации нервных волокон
ВВ и стволовые клетки
«Лидерами» в производстве экзосом считаются стволовые клетки.

Начиная с 2010 года пристальное внимание исследователей привлекают экзосомы мезенхимальных стволовых клеток (MSCs). Дело это не такое простое, так как изучение культивируемого MSCs белкового состава показывает большое разнообразие и количество белков: в среднем, около 400. При этом, около 150 из них — общие для разных партий культивируемых MSCs.

Видимо, они оказывают комплексное воздействие на организм, эффект от которого сравним с использованием самих стволовых клеток.

Но при этом у экзосом более высокий профиль безопасности. На моделях грызунов изучали возможность использования экзосом при повреждении почек, печени, сердечной недостаточности и для регенерации скелетных мышц. Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки и образованные из них MSC (iMSCs), судя по всему, превосходят мезенхимальные по количеству производимых экзосом и также активно изучаются с целью терапевтического воздействия (Yanning Liu, 2017).
ВВ и нервная система
Одним из примеров сложной в высшей степени сигнализации с участием ВВ является нервная система (НС). Она требует особенно высокого уровня интерактивного обмена между сенсорными и моторными нейронами, интернейронами и глией.

Показано, что при деполяризации кортикальные нейроны высвобождают ВВ, содержащие различные белки (молекула клеточной адгезии L1 (L1CAM), Glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins (GPI-APs) и glutamate receptor subunit GluR2/3), регулируя таким образом синоптическую активность.

Недавно было обнаружена роль ВВ в нервном развитии через миРНК-несущие ВВ в эмбриональной спинномозговой жидкости (eCSF) как грызунов, так и людей. Добавление eCSF-производных ВВ к нервным стволовым клеткам активировало путь mTORC1, увеличивая скорость пролиферации этих стволовых клеток.

Также известно, что нейроны утилизируют рецепторы нейромедиаторов и миРНК посредством ВВ для регулирования их возбудимости. ВВ выпускаются практически из всех типов клеток в мозге, включая нейральные стволовые/прогениторные клетки, нейроны, астроциты, олигодендроциты и микроглии, а также шванновские клетки и нейроны периферической НС (Breakefield X.O., 2016).

ВВ-сигнализация имеет особое значение в регуляции физиологической функции ЦНС, и астроциты, микроглия, олигодендроциты и нейроны общаются друг с другом через секрецию ВВ. И эта коммуникация на основе ВВ может простираться за пределы ЦНС.

Результаты последних исследований показывают, что при воспалении ВВ, полученные из нервных стволовых клеток, индуцируют активацию провоспалительных цитокинов, сигнальных молекул в иммунных клетках (Indiveri C., 2019). Что показывает потенциальную роль для ВВ-опосредованных перекрестных связей между ЦНС и иммунной системой за пределами гематоэнцефалического барьера.
Коммуникация для новой жизни
Кстати, ВВ — первый способ, которым можно ответить «нет» поклонникам. Именно так и поступает яйцеклетка после оплодотворения, выделяя в своих ВВ рецепторы к сперматозоидам и предотвращая таким образом полиспермию.

ВВ в семенной жидкости играют важную роль в оплодотворении, защищая сперматозоиды в женских половых путях и регулируя их подвижность и созревание.

Многочисленные функции ВВ в физиологии спермы основаны на способности переносить молекулы либо в сперматозоиды, либо в иммунные клетки женского репродуктивного тракта. Сперматозоиды вступают в контакт с несколькими типами ВВ, которые могут затем способствовать оплодотворяющей способности, изменяя молекулярный состав и поведение. Сперматозоиды вступают в контакт с простасомами.

Было высказано предположение, что простасомы играют роль в регуляции конденсирования и экзоцитоза акросом. Это сложная серия биохимических и биофизических изменений, которые сперматозоиды претерпевают в треке женских половых органов, чтобы приобрести свойства для оплодотворения и достичь ооцита (Yáñez-Mó M., 2015).
Внеклеточные везикулы как средство поддержания внутриклеточного гомеостаза (чистильщики)
Клетка постоянно балансирует на грани принятия решений. Не ломается только тот, кто не работает. А это явно не про наши клетки.

Внешний стресс (термический, физический, химический) и внутренний стресс (оксидативный) — это реалии жизни каждой клетки, приводящие к всевозможным повреждениям. Клетка оснащена широким арсеналом контроля качества для их распознавания.

Если повреждение незначительное, то ферменты пытаются его починить (например, аккуратно свернуть нарушенный белок). Если слишком сильные, клетка (или ее часть) погибнет в ходе аутофагии. Но между этими двумя решениями есть еще спектр решений, способных «спасти» гомеостаз в клетке. Среди них — высвобождение «поломанных» вредоносных компонентов при помощи ВВ (рис.7).
Рисунок 7
Деградация vs секреция в эндолизосомальной системе поддержания внутриклеточного гомеостаза
Долгое время после открытия ВВ считались всего лишь пакетами с мусором (избыточный и поломанный белок и др.). Ну, просто у клеток нет централизованного мусоропровода, как в многоэтажке, поэтому свои «кульки с мусором» они выбрасывают, как "нехорошие" люди во двор — в межклеточное пространство. Уже потом обнаружили, что это не отходы клетки, а важные факторы сигналинга и репрограммирования, которые «подбрасываются» не под дверь соседу, а ищут конкретный клеточный адресат.

Тем не менее, роль «очистки» в поддержании гомеостаза экзосомы все же выполняют. И кто бы мог подумать, что клеточным мусором может быть такая ценная молекула, как ДНК.

История открытия началась в сенесцентных клетках, у которых существенно возрастает секреция везикул. Ученые решили заблокировать избыточную секрецию — вдруг клетки теряют много полезных веществ и поэтому становятся сенесцентыми?
Но они не то что не стали моложе, это спровоцировало рост АФК и ответ на повреждение ДНК, DDR (DNA Damage Response). Ядерные фрагменты накапливались и распознавались сенсором цитоплазматической ДНК — STING.

STING — важный игрок врожденного иммунитета: он распознает вторжение вирусов и бактерий в клетку, стимулируя выработку интерферона 1, и реагирует на свою ДНК, если та не на положенном месте, не в ядре (Akiko Takahashi, 2017).

Цитоплазматическая ДНК детектируется сенсором ДНК как опасный сигнал, что приводит к активации врожденного иммунитета.

Даже в несенесцентных клетках ингибирование секреции ВВ увеличивает количество внутрицитоплазматической ДНК и индуцирует апоптоз и/или арест роста (Masaki Takasugi, 2018).
Таким образом, экзосомы помогают удалять «вредную» цитоплазматическую ДНК из клеток, поддерживая клеточный гомеостаз. Этот же механизм может использоваться не только для удаления своей «нежелательной» ДНК, но и для удаления наследственного материала вирусов из клетки.

Изучение состава экзосом показало, что селективное высвобождение вредоносных, отслуживших компонентов клетки не ограничивается ДНК. Сюда также относится выделение неправильно свернутых и агрегированных белков (Gabriela Desdín-Micó, 2017).

Выделение липидов также может происходить, хотя этот процесс менее изучен. Использование куркумина на клетках с поврежденным антипсихотиками гомеостазом приводило к высвобождению ЛПНП в виде везикул, улучшая показатели липидного гомеостаза.
Но навести гомеостатический порядок — это не только выбросить мусор, но и необходимость задействовать более тонкие механизмы. Если вам кто-то не дает что-то делать дома, просто отправьте его погулять. Примерно так и поступают клетки с репрессорами дифференцировки, например.

Выделение РНК и микро-РНК регулирует экспрессию генов при активации или трансформации клеток. Например, при индукции мышечной атрофии клетки выделяют фактор miR-23, который подавлял FoxO, стимулирующий развитие атрофии. При активации лимфоциты «отправляют в свободное плавание» miR-150, репрессора их дифференцировки.

Также клетки может «избавляться» от активной каспазы 3, ритуального кинжала, которым она планировала совершить харакири, но по тем или иным причинам передумала.

«Выбрасываться» из клетки при помощи ВВ может и более «крупный» мусор. Например, митохондрии.
Митохондрии — очень важные органеллы клетки, которые известны благодаря способности обеспечивать клетку энергией АТФ в процессе кислородного дыхания.

Клетка должна следить за качеством своих митохондрий: если в них что-то нарушается, они начинают производить большое количество активных форм кислорода, что приводит к оксидативному стрессу и к гибели клетки. Поврежденные митохондрии клетка удаляет в процессе митофагии: испорченная митохондрия отмечается специальной меткой, образуется аутофагосома и митохондрия «переваривается».

Особенно за качеством митохондрий должны следить стволовые клетки. Стволовые клетки получают энергию в основном за счет гликолиза, а не за счет кислородного дыхания, так как чувствительны к оксидативным повреждениям, и митохондрии у них должны поддерживаться в незрелом, очень юном состоянии.
Но процесс «удаления» поврежденных митохондрий довольно сложный и энергозатратный. Более того, стволовым клеткам могут «вредить» даже вполне хорошие, но уже достаточно зрелые, митохондрии. Поэтому мезенхимальные стволовые клетки научились передавать задачи утилизации митохондрий на аутсорс. Они упаковывают митохондрию в ВВ и отправляют к макрофагам, которые ее ловят и даже могут использовать для увеличения своей биоэнергетики (Donald G.Phinney, 2015).

Такой тип митофагии — «митофагия на аутсорс», или трансмитофагия, может быть использована также в других клетка.

Так, митохондрии ретинальных ганглиозных клеток подвергаются лизосомальной деградации в астроцитах головки зрительного нерва. Исследуют возможность такого типа митофагии в длинных отростках нервных клетках, так как деградация митохондрии может происходить только в теле нейрона (там присутствуют лизосомы), а до него митохондрии необходимо пройти длительный путь отростка нейрона. Гораздо удобнее было бы «упаковать» ее в пакет с мусором и отправить на утилизацию, например, в астроцит (Chung-ha O.Davis, 2014).

Могут митохондрии передаваться при помощи ВВ не только в качестве мусора, но и в качестве «спасительной посылки первой помощи».

Так, астроциты могут отправлять митохондрии, упакованные с АТФ и липидами, к нейронам при ишемических состояниях и острой необходимости в поддержании энергетики клетки. В противном случае есть риск гибели нейронов. Такая вот своеобразная «первая помощь» для восстановления гомеостаза (Falchi A.M., 2013; Caicedo A., 2017).

При этом, митохондрии сами по себе тоже могут использовать ВВ как средство для упаковки образованного мусора, и это важный этап контроля их качества (Ayumu Sugiura, 2014).
Внеклеточные везикулы и перенос генетической информации
Везикулы могут содержать фрагменты молекулы ДНК и различных кодирующих и некодирующих РНК (микроРНК, длинноцепочечную РНК, кольцевую РНК, тРНК, рРНК и др,).
мРНК
Матричная, или информационная, или белок-кодирующая, РНК (мРНК, mRNA) является матрицей для синтеза аминокислотной белковой последовательности, из которой потом образуется тот или иной белок. На нее «переписывается» информация с ДНК в ядре клетки, а потом мРНК отправляется в цитоплазму к рибосомам, где и происходит сборка будущего белка.

Если такую матрицу «упаковать» в экзосому и отправить клетке-адресату, то в ней может синтезироваться белок даже не характерный для данного типа клеток.

Интересно, что изучение ряда клеток опухолей показало, что определенная доля мРНК идет только «на экспорт», т.е. обнаруживается только в ВВ, выделяемых данной клеткой, но не обнаруживается в самой клетке.

Таким образом, экзосомальная мРНК является функциональной и может переходить в процесс трансляции к таргетной клетке, непосредственным образом влияя на производство белка в клетке-мишени.

В исследовании Ratajczak, опубликованном в 2006 году, автор выделил везикулы из культивированных стволовых клеток и обнаружил, что эти везикулы содержат РНК (Ratajczak, 2006), которая может быть доставлена к другим типам клеток (например, гемопоэтические клетки-предшественники).

Этот перенос молекулярной информации побуждал клетки-реципиенты вырабатывать маркерные белки, характерные для плюрипотентных, эволюционно гибких стволовых клеток, из которых возникли везикулы.

Это открытие имело важное значение для регенеративной медицины. Внеклеточные везикулы из стволовых клеток, в том числе и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, могут быть использованы для прямого восстановления поврежденной ткани. Более того, такой подход позволил бы избежать необходимости введения пациентам потенциально иммуногенных клеток.

По мнению ученых, используя везикулы, полученные из стволовых клеток, возможно было бы проводить терапию стволовыми клетками без этих клеток. Как показали исследования, внеклеточные везикулы несут РНК с регенеративным потенциалом. Везикулы, полученные из эндотелиальных клеток-предшественников, вызывали прорастание новых капиллярообразных кровеносных сосудов (Karen Hopkin, 2016).
МикроРНК
МикроРНК(miRNA) — это маленькие некодирующие однонитевые РНК (по ним нельзя собрать белок). Они не кодируют белки сами, но широко известна их способность влиять на экспрессию генов: микроРНК могут влиять на синтез белка, ингибируя трансляцию мРНК. То есть прибыв в клетку-мишень, посылка с микроРНК может коренным образом изменить ее работу.

«Упаковка» микроРНК в везикулы защищает ее от нуклеаз на пути до таргетной клетки. Интересно, что микроРНК может упаковываться в везикулы сразу с белками, необходимыми для ее процессинга или работы (Samuelson I., 2018).

Большую роль играет транспорт микроРНК с экзосомами в становлении и метастазировании опухолевых процессов.

Последние годы активно изучается роль экзосомальной микроРНК в нейродегенеративных заболеваниях (мозг содержит 70% известных микроРНК), мышечной саркопении и дегенерации сетчатки (Kim K.M., 2017).
днкРНК
Длинная некодирующая РНК (днкРНК, lncRNA). Этот класс РНК был открыт около 30 лет назад, но только последние годы начала проясняться их роль в жизни клетки. Они участвуют в контроле организации хроматина, транскрипции генов, трансляции белков, сборке макромолекулярных суперкомплексов.

Данный тип РНК изучали в ВВ клеток опухоли. Вероятно, она работает «в связке» с микроРНК. Служат ли везикулы с днкРНК своеобразной «губкой», которая потом «ловит» везикулы с микроРНК, либо же они способствуют загрузке микроРНК в экзосомы, до конца не ясно.
Кольцевые РНК
Кольцевые РНК (circRNA) относятся к некодирующим РНК, обнаруживаются в эукариотических клетках, образуются при помощи альтернативного сплайсинга и являются достаточно долгоживущими (у них нет концов, которые могли бы расщепиться эндонуклеазами).

Перенос ДНК при помощи ВВ изучен гораздо в меньшей степени, чем различных видов РНК. Тем не менее, ВВ могут переносить ДНК как в виде небольших ее фрагментов (около 100 п.о.), так и внушительных размеров цепи (несколько миллионов п.о.). При чем большая часть ДНК, переносимая ВВ, связана с их внешней мембраной, а не упакована внутрь пузырька, как это происходит с другими молекулами.

Внеклеточные функции РНК данного типа еще не до конца изучены, вероятно, они выполняют регуляторную роль.

Недавно было показано наличие и стабильность кольцевых РНК в везикулах, выделяемых раковыми клетками, что позволяет их использовать в качестве потенциального чувствительного и специфичного биомаркера для ранней диагностики (Daniele Fanale, 2018).

Роль переноса ДНК от клетки к клетке еще не до конца изучена. Недавнее исследование показало, что поверхностно-связанная ВВ-ДНК играет важную роль в связывании ВВ с фибронектином, (Nemeth A., 2017) гликопротеином внеклеточного матрикса, который имеет жизненно важное значение в процессах, связанных с прогрессированием опухоли (Wang J.P., 2017).

Единого мнения касательно того, может ли ДНК, доставленная с ВВ, функционировать в клетке-реципиенте, еще нет. Показано, что некоторые фрагменты ДНК, связанные с ВВ, содержат целые гены с промоторной и терминаторной областями (Gezsi A., 2019; Sukhvinder G., 2019). Эксперименты на модельном растении Arabidopsis thaliana показали, что ДНК, транспортируемая при помощи ВВ, может интегрироваться в геном клетки-реципиента, что подтверждает идею о горизонтальном трансфере ДНК при помощи ВВ (Stefanie Fischer, 2016).
мтДНК
Помимо двуцепопчечной ДНК в ВВ могут переноситься и другие ее типы, например, митохондриальная ДНК (мтДНК). В частности, исследуется роль переноса в онкологии молочной железы и других типах рака (Sansone P., 2017). МтДНК в микроокружении опухоли могут приводить к активации нейтрофилов и неблагоприятным прогнозам овариального рака (Singel K.L., 2018).

Помимо этого, концентрация внеклеточной мтДНК является важным маркером хронического воспаления, сопровождающего старение и нейродегенеративные заболевания.

Одним из путей выделения мтДНК в межклеточное пространство является ее упаковка в экзосомы (Anna Picca, 2018). При этом увеличение количества внеклеточной мтДНК сопровождает не только связанное с возрастом хроническое воспаление в мозге, но и, вероятно, вносит вклад в патогенез аутизма. Так, было показано, что в сыворотке крови детей с аутизмом было большое количество ВВ с мтДНК, провоцирующей воспалительные процессы через активацию микроглии (Irene Tsilioni, 2018).
comments powered by HyperComments